トランスフォーメーションTransformation

1. -80℃で保存してあるE. coli DH5α Competent Cells 5 µl（TaKaRa, 購入時は100 µl/tubeなので氷水中で分注する）を氷水上で融解した後、氷水中に置いておいたライゲーション反応液0.5 µlを添加し氷水中で30分間静置する。Thaw 5 µL of E. coli DH5α Competent Cells (TaKaRa; aliquot in ice water as purchased in 100 µL tubes) in ice water, add 0.5 µL of the ligation reaction kept in ice water, and incubate on ice for 30 min.
2. 30分待っている間に①振盪培養機、②ヒートブロックのスイッチを入れ、③SOC培地と必要なら抗生物質、（LBプレートを作製してから、1ヶ月以上経っている場合は、抗生物質を追加した方が良いです。この場合40 µl/plateをガラスビーズで塗り広げる。）を冷凍庫から出す。また、④使用するLBプレートを冷蔵庫から出し、室温に戻しておく。During the 30-min incubation: ① turn on the shaking incubator, ② turn on the heat block, ③ take out SOC medium and antibiotics if needed (if LB plates are older than 1 month, add extra antibiotic at 40 µL/plate with glass beads), ④ take out LB plates from the refrigerator and let them warm to room temperature.
3. その後42℃で45秒間のヒートショックを与え、素早く氷水中に移し、1分間静置する。Apply heat shock at 42 °C for 45 s, then immediately transfer to ice water and incubate for 1 min.
4. SOC培地45 µlを加え、37℃で1時間100 rpmで振盪培養する（培養しないで抗生物質入りの培地に入れると耐性遺伝子が発現せず、コロニーができません。）。Add 45 µL of SOC medium and incubate at 37 °C, 100 rpm for 1 hour (without this recovery step, resistance genes will not be expressed and no colonies will form).
5. TAクローニングの際には、インサートの挿入の有無を区別するため、カラーセレクションを行う方が楽です。20 mg/ml X-gal、100 mg/ml IPTGを20 µlずつLB寒天培地に塗り拡げ、60分間乾燥させたものを用いる。For TA cloning, blue-white selection simplifies distinguishing insert-containing colonies: spread 20 µL each of 20 mg/mL X-gal and 100 mg/mL IPTG on LB agar plates and dry for 60 min before use.
6. 適切な構成物質（導入するベクターによる） を含むLB寒天培地にガラスビーズを用いて、全溶液をプレート全面に塗り広げ、37℃または30℃で一晩培養する。Spread the entire transformed culture over LB agar plates containing the appropriate components (depending on the vector used) using glass beads, and incubate overnight at 37 °C or 30 °C.